Las muestras deberán traerse en un tubo de 0.5 ml (tubos de PCR) y contendrán:
ADN (*)
Cebador (**)
dH2O
(*): El ADN debe cuantificarse bien en un gel de agarosa (junto a unos patrones de concentración conocida) y/o por densidad óptica, teniendo en cuenta que:
Abs 260 nm/ Abs 280 nm = 1.7 - 2.0
Abs 230 nm/ Abs 260 nm = 0.3 - 0.6
Un ADN sucio (con proteínas, fenol, sales, etc...) no funcionará bien en la reacción de secuenciación por Taq polimerasa, así que es necesario limpiarlo previamente por re-precipitación; ultracentrifugación, etc...
(**): Esta tabla os ayudará a encontrar la equivalencia entre ng y pmoles para oligos de distintas longitudes:ß
Longitud del cebador ng de cebador equiv. a 10 pmoles 15 mer 50 ng 16 mer 53 ng 17 mer 57 ng 18 mer 60 ng 19 mer 63 ng 20 mer 67 ng 24 mer 80 ng 27 mer 90 ng 31 mer 103 ng