SECUENCIACION AUTOMATICA EN GELES DESNATURALIZANTES DE ACRILAMIDA/BIS

La secuenciación automática mediante geles desnaturalizantes, se realiza polimerizando un gel de acrilamida/bis entre dos cristales montados adecuadamente sobre el cassette que sirve de soporte para los mismos y que posteriormente se acopla en el secuenciador automático para proceder a la carga de la muestras.

El número de muestras que podemos cargar en cada gel, viene determinado por el número de pocillos que posee el peine ( de dientes de tiburón) que utilicemos. Hay peines de cuatro tamaños distintos: de 36, 48, 64 y 96 pocillos.

La electroforesis se desarrolla durante 7 horas, y se puede realizar una lectura de unos 700pb aproximadamente, dependiendo siempre de la calidad del ADN, de la correcta cuantificación del mismo, de la utilización del primer adecuado, y de la polimerización correcta del gel de acrilamida/bis principalmente.

Cuando las muestras a secuenciar tienen una longitud no superior a 400pb, podemos disminuir el tiempo de la electroforesis a 3.5 horas, aumentando la velocidad de barrido del laser, y el resultado es igualmente optimo.